722分光光度計(jì)基線校正的原因、方法和注意事項(xiàng)
對(duì)于雙光束分光光度計(jì)而言在使用前必須要做基線校正（也稱為基線記憶）。
一、為何要做基線校正
眾所周知，光度計(jì)的光學(xué)系統(tǒng)基本是由光源（氘燈、鎢燈）、單色器（光柵、狹縫）、檢測(cè)器（光敏二極管、光電倍增管）等三部分組成的。在我們使用的波長(zhǎng)區(qū)域中，上述部件在不同的波長(zhǎng)下的響應(yīng)值（光源的發(fā)射強(qiáng)度、單色器的色散強(qiáng)度、檢測(cè)器的放大倍數(shù)）均不相同。通俗地說(shuō)、即使沒(méi)有樣品，儀器如果不做基線校正，那么在190nm至 1100nm的范圍中，吸光值或透過(guò)率不會(huì)是一條直線，這是一種客觀的物理現(xiàn)象。
二、被校正的基線種類和用途
1)系統(tǒng)基線
所謂系統(tǒng)基線就是儀器固有的波長(zhǎng)范圍的總基線。例如一臺(tái)儀器出廠設(shè)計(jì)的波長(zhǎng)全程范圍是190nm至1100nm，那么它的系統(tǒng)基線就是這個(gè)范圍。一般來(lái)講，作為分析人員對(duì)一臺(tái)儀器做全程掃描測(cè)試是比較少見(jiàn)的。之所以要做系統(tǒng)基線的目的一般是將儀器的光學(xué)系統(tǒng)的響應(yīng)值校正到基本一致。
2)用戶基線
所謂用戶基線就是分析者自己設(shè)定的測(cè)量波長(zhǎng)區(qū)域的一段基線。由于這是分析所需要的區(qū)域，為了保證測(cè)試的準(zhǔn)確性，故用戶基線的校正是非常重要和必要的。
三、基線校正的方法
1) 系統(tǒng)基線校正
系統(tǒng)基線的校正較為簡(jiǎn)單，一般情況下樣品室內(nèi)不放樣品，僅做光學(xué)系統(tǒng)的校正。如果一定要使用全波段的測(cè)量那另當(dāng)別論。
同時(shí)需要注意的是系統(tǒng)基線無(wú)需經(jīng)常校正，一般半個(gè)月或一個(gè)月校正校正一次即可。對(duì)有的儀器來(lái)說(shuō)，系統(tǒng)基線校正過(guò)于頻繁反而會(huì)造成基線漂移嚴(yán)重。
2) 用戶基線校正
正確的校正方法是：兩只比色杯盛有空白溶液分別放置在樣品及參比光路中，校正波長(zhǎng)范圍要大于分析波長(zhǎng)范圍。例如分析設(shè)定范圍為220nm—500nm，那么校正波長(zhǎng)就要設(shè)定為210nm—510nm，等待校正結(jié)束后再將波長(zhǎng)設(shè)定回到原來(lái)的220nm—500nm范圍。
這種校正方法如果校正波長(zhǎng)與分析波長(zhǎng)完全吻合一致，有可能在校正后的基線兩端出現(xiàn)大的噪聲，如果校正范圍大于實(shí)際分析范圍并掐頭去尾后可以提高分析精度。
值得注意的是，有的儀器操作者在做基線校正時(shí)，參比一側(cè)不放參比溶液，也就是用空氣來(lái)做參比對(duì)照。這種方法在可見(jiàn)區(qū)對(duì)有的樣品也許有時(shí)影響不大，但在紫外區(qū)影響就會(huì)很明顯了。嚴(yán)格的說(shuō)，用空氣做參比所測(cè)得的結(jié)果不是真正意義上的校正光譜。
四、基線校正的注意事項(xiàng)
1) 基線校正時(shí)要保證儀器有一定的預(yù)熱時(shí)間
2) 每更換一種參比溶液后均要重新做基線校正
3) 如果參比溶液的吸光度大于樣品的吸光度值時(shí)測(cè)試結(jié)果會(huì)出現(xiàn)負(fù)值，此時(shí)要考慮使用何種溶液做基線校正了。
4) 做基線校正時(shí)要考慮試劑的使用波長(zhǎng)范圍問(wèn)題，因?yàn)橛械脑噭┰谀硞�(gè)波長(zhǎng)以下的吸光度值會(huì)無(wú)限大，這時(shí)去做校正會(huì)超出儀器的有效量程范圍，無(wú)法得到真正的結(jié)果。關(guān)于試劑的使用波長(zhǎng)范圍，目前一般在試劑瓶的標(biāo)簽上會(huì)有標(biāo)注。
