一、超高效液相色譜介紹
超高效液相色譜（Ultra Performance Liquid Chromatography\ UPLC）是分離科學(xué)中的一個(gè)全新類別，UPLC借助于HPLC（高效液相色法）的理論及原理，涵蓋了小顆粒填料、非常低系統(tǒng)體積及快速檢測(cè)手段等全新技術(shù)，增加了分析的通量、靈敏度及色譜峰容量。超高效液相色譜是一個(gè)新興的領(lǐng)域，作為世界第一個(gè)商品化UPLC產(chǎn)品的Waters ACQUITY UPLCTM超高效液相色譜系統(tǒng)在1996年問(wèn)世，之后像安捷倫、島津等公司也陸續(xù)開(kāi)始生產(chǎn)超高效色譜儀。目前，超高效液相色譜儀已經(jīng)開(kāi)始逐漸地投入液相實(shí)驗(yàn)中。
二、超高效液相色譜技術(shù)參數(shù)
列舉部分儀器的個(gè)別參數(shù)，供參考：
1、泵系統(tǒng)
最大操作壓力 15000psi（1mL/min）
流速范圍：0.001-2.000mL/min, 增量0.001mL；
流速精度：0.075% RSD；
流速準(zhǔn)確度：±0.5%；
梯度準(zhǔn)確度：± 0.3%；
梯度精度：0.15%RSD；
壓力范圍：0-15,000 psi；
真空脫氣機(jī)：在線真空脫氣，六通道均可在線脫氣，有自動(dòng)柱塞清洗和進(jìn)樣針清洗功能。
2、溫控自動(dòng)進(jìn)樣器
進(jìn)樣精度：<0.3%RSD；
進(jìn)樣準(zhǔn)確度：±1 μl；
進(jìn)樣線性度：> 0.999；
進(jìn)樣體積：0.1 to 50 μL，增量0.1μL；
樣品污染度：<0.004%；
樣品溫度范圍：4°C -40°C，增量：1°C，帶制冷功能；
溫控穩(wěn)定性：±0.5℃；
樣品盤(pán)數(shù)：96，384 兩種規(guī)格；
樣品瓶：2mL樣品瓶，0.65mL,1.5mL兩種規(guī)格的離心管。
3、柱溫箱
溫度范圍：室溫以上5°C -90°C；
控溫精度：±0.1°C；
溫度準(zhǔn)確性±0.5℃。
二極管陣列檢測(cè)器：
二極管數(shù)：≥1024；
波長(zhǎng)范圍：190-800 nm；
分辨率：≤1.2 nm；
波長(zhǎng)準(zhǔn)確度：≤±1nm；
波長(zhǎng)精度：≤±0.1nm；
基線噪音：＜±1.0×10-6AU；
基線漂移：＜1×10-4AU/h；
最大采集頻率：≥100 Hz；
4、檢測(cè)器配置
紫外可見(jiàn)檢測(cè)器、光電二極管矩陣檢測(cè)器、蒸發(fā)光散射檢測(cè)器
三、超高效液相色譜解讀
UHPLC的標(biāo)志性特點(diǎn)就是壓強(qiáng)高，進(jìn)樣量少，死體積小，流速慢，出峰快。耐壓是首要的，然后就是色譜柱了，其次就是儀器系統(tǒng)的整體設(shè)計(jì)。對(duì)UHPLC來(lái)說(shuō)，重點(diǎn)還是流量的精準(zhǔn)和耐壓，還有就是延遲體積小，響應(yīng)時(shí)間要夠快。
而對(duì)耐高壓系統(tǒng)的評(píng)價(jià)，一般12000psi可以耐受大部分的試驗(yàn)條件，如果色譜條件更改導(dǎo)致壓力再提升，色譜柱的壽命可能會(huì)受影響，可能得不償失。對(duì)于絕大多數(shù)要進(jìn)行成本核算的使用者來(lái)說(shuō)。
有多少個(gè)方法的流速是需要設(shè)置到小數(shù)點(diǎn)后第三位的？絕大多數(shù)方法的流速是1.0ml/min或者0.8ml/min之類的設(shè)置，小數(shù)點(diǎn)后兩位的精度足夠我們用了。目前大多數(shù)色譜軟件識(shí)別色譜峰的保留時(shí)間窗都是5%。延遲體積，對(duì)于新開(kāi)發(fā)的方法或者方法傳遞的要求而言，是越小越好。目前各廠家好像都能控制在500ul以下，甚至于100ul以下。
根據(jù)檢測(cè)的樣品來(lái)定小內(nèi)徑小填料色譜柱的規(guī)格。
高靈敏小檢測(cè)池的檢測(cè)器，與普通LC檢測(cè)器相比，檢測(cè)器的耐壓，更高，靈敏度要高幾倍。DAD檢測(cè)器也很有門(mén)道，要達(dá)到更高的靈敏度和信噪比，目前的潮流是全反射光纖流通池。貌似Agilent的是 TeflonAF管的材質(zhì)（比金子都貴的材料呀），也有用石英光纖的。Waters的流通池貌似改過(guò)幾版，老一些UPLC上的是掛在外面的粗棒子，新的放在機(jī)箱內(nèi)了。
在流動(dòng)相必須用緩沖鹽的情況下，部分實(shí)驗(yàn)人員更愿意用HPLC。因?yàn)橛肬PLC的時(shí)候，對(duì)流動(dòng)相和樣品的前處理要求明顯要高很多，不然極易堵柱和系統(tǒng)。對(duì)于大多數(shù)使用者來(lái)說(shuō)，應(yīng)該都是希望購(gòu)買(mǎi)的不是最貴的，而是最合適的儀器。
（內(nèi)容來(lái)源液相色譜之家）
