液相色譜檢測(cè)中,柱壓是非常重要的一個(gè)儀器參數(shù),需要時(shí)刻關(guān)注柱壓情況,當(dāng)柱壓偏高時(shí)是哪些原因造成的呢,怎么解決呢?
1、色譜柱保存不當(dāng)
色譜柱如較長(zhǎng)時(shí)間不用,重新啟用后需按說(shuō)明書(shū)的活化方法重新活化后再使用,否則會(huì)出現(xiàn)柱壓升高,柱效下降。
除另有規(guī)定外,一般反相色譜柱都需保存在高比例有機(jī)相中,以防止微生物滋生。否則重新啟用時(shí),會(huì)因微生物滋生而導(dǎo)致柱壓異常升高,這種情況可以嘗試用乙腈-水-TFA=50-50-0.1低流速過(guò)夜沖洗色譜柱。
2、樣品污染
待檢測(cè)樣品成分復(fù)雜,部分成分死吸附在柱頭端,導(dǎo)致柱壓升高,柱效下降。這種情況下建議采用小孔徑的濾頭或?yàn)V膜(如0.22μm)進(jìn)行過(guò)濾后再進(jìn)樣,以盡量減少污染物進(jìn)入色譜柱。
中藥項(xiàng)目往往樣品會(huì)比較臟,使用一定時(shí)間后,會(huì)因柱頭污染導(dǎo)致色譜柱性能下降,這種情況下可將色譜柱反接并按說(shuō)明書(shū)的沖洗方法進(jìn)行沖洗。
也可以加保護(hù)柱,保護(hù)柱為一種犧牲式攔截污染,有一定的使用壽命。做的過(guò)程中關(guān)注柱壓,如柱壓升高10%,則需更換保護(hù)柱芯。有些柱溫箱無(wú)法放入保護(hù)柱,則可嘗試將保護(hù)柱接在柱前,進(jìn)樣品后,但這種情況需對(duì)比不加保護(hù)柱的分析圖譜,確定沒(méi)有因保護(hù)柱與檢測(cè)色譜柱的柱溫差異而產(chǎn)生色譜圖差異的情況下,才可以使用。
還要注意定期維護(hù)色譜柱,對(duì)于確認(rèn)是樣品污染導(dǎo)致色譜柱使用一段時(shí)間柱效下降的,建議對(duì)該項(xiàng)目使用的色譜柱反接后按說(shuō)明書(shū)的異常再生方法進(jìn)行定期維護(hù),這種處理的好處是能減少柱子污染物聚集,延長(zhǎng)色譜柱使用壽命。
檢測(cè)蛋白類樣品,容易因蛋白聚集導(dǎo)致柱壓升高,柱效下降,這種情況可以用乙腈-水-TFA=50-50-0.1低流速過(guò)夜沖洗色譜柱。
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