液相色譜儀和氣相色譜儀相比的優(yōu)勢有很多,主要在于應(yīng)用范圍更廣。氣相只限于容易氣化的低分子量物質(zhì)的分析測定,對象大部分是基礎(chǔ)化工原材料。而任何能溶解于某溶劑的物質(zhì)都能用液相分析,適用對象是分子量從幾十到幾萬的廣大范圍。在制藥、化工、環(huán)保、食品等諸多重要領(lǐng)域,液相都已成為主導(dǎo)的分析工具。也有兩者都能應(yīng)用的交叉情況,但液相的制樣更簡單。液相色譜的出現(xiàn)克服了氣相色譜不能直接用于難揮發(fā)、熱不穩(wěn)定及高分子化合物的弱點。
液相色譜同一個樣品重復(fù)進樣時,為什么峰面積會波動呢?導(dǎo)致這種結(jié)果的原因有很多。
如果樣品穩(wěn)定的話,首先排除儀器的故障,有氣泡是最主要的一種,氣泡的產(chǎn)生會導(dǎo)致進樣之間體積的不規(guī)律變化。
如果樣品之間的濃度相差很大,而進樣2-3針后同一個峰的峰面積保持不變,那么可能是樣品殘留。
峰面積的減少也有可能是溫度引起的,但是這個影響很小,小于2%。如果你把樣品從冰箱里拿出來放到進樣器里,它會慢慢的升溫,體積就會變大。這樣前后的進樣體積就有差別了。
流速的隨機變化也會導(dǎo)致峰面積變化,流速改變的另一個潛在原因是系統(tǒng)高壓部位漏液了,這個應(yīng)該很容易發(fā)現(xiàn)。
復(fù)雜樣品中如果有肩峰(與目標峰局部分離),軟件就很難判斷基線在哪里。這時采用手動積分或者用強制基線自動積分將會改善積分的重現(xiàn)性。樣品本身也會造成峰面積變化。在反相色譜中發(fā)現(xiàn)有些蛋白質(zhì)在開始的梯度中不能完全洗脫,殘留的會出現(xiàn)在接下來的空白梯度中,這些鬼峰只在特定的蛋白質(zhì)和洗脫程序中出現(xiàn)。如果是這樣,就要在分析樣品后添加空白。另外,蛋白質(zhì)會不可逆的黏附在有些柱子內(nèi),隨著進樣的增加,樣品的峰面積會慢慢變大。
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