液相色譜柱使用壽命大約為1000針,保護柱的壽命大約為280針。色譜柱的使用壽命主要受色譜條件、使用方式和保存條件的影響。
一、色譜條件
1、在相同實驗中,以前使用的色譜柱壽命長很多
這種情況應該檢查一下色譜條件是否保持一致,樣品的組成、樣品中強吸收的污染物會破壞色譜柱的柱效。檢查管路的密封圈是否完好?脫落的密封圈會堵塞色譜柱過濾器和填料的頂層,從而影響樣品的分布。
如果可以確認色譜條件沒有變化,那么可以推測是柱床松動的原因。在實驗室和運輸過程中色譜柱劇烈的震動都會導致柱床松動。
2、在實驗中用過的所有的色譜柱在使用相同次數(shù)后全部損壞
最大可能是樣品中的成分吸附在色譜柱的頂端�?赡苁窃诹鲃酉嘀胁蝗艿某恋砦锘蛘呤菑娢盏奈镔|。
二、使用方法
按照生產(chǎn)商的說明使用柱子的話一般很少發(fā)生,但實際使用中會出現(xiàn)各種情況。
1、流動相pH超出使用范圍,導致的柱子鍵和相水解或基質溶解。樣品用強酸或強堿溶解的話也會發(fā)生上述情況。
2、高溫也會導致色譜柱損壞,如高溫會加速鍵合相溶解。
3、特殊柱子注意事項,例如氨基柱可以和醛,酮反應。氨基柱在不含緩沖鹽的水溶液中會顯強堿性,分解部分硅膠;
4、暴露在錯誤溶劑中的柱子會發(fā)生坍塌,因為這些柱子是基于非常松散的結構,是因顆粒之間的黏著而部分的結合在一起的。如果置于能破化這種黏著的流動相中,柱床很有可能會坍塌。氰基柱在中性溶液,苯基柱在THF中有時就會發(fā)生這種問題。這也是不要沖洗柱子的另一個理由。
5、采用合適的樣品準備技術處理樣品。用和分析柱相似的固相萃取柱進行固相萃�。�SPE)。
6、使用保護柱。保護柱是作為犧牲柱裝在色譜柱前使用的,出現(xiàn)問題的時候就會被替換掉。保護柱的填料和裝填技術必須和分析柱一樣;
7、反沖柱子。反現(xiàn)在的裝填技術可以使柱子承受反沖,能更好的去除柱頭端的污染物。
三、保存條件
反相色譜柱每天實驗后的保存:使用緩沖液或含鹽的流動相,實驗完成后應用10%的甲醇/水沖洗30分鐘,洗掉色譜柱中的鹽,再用甲醇沖洗30分鐘。注意:不能用純水沖洗柱子,應該在水中加入10%的甲醇,防止將填料沖塌陷。
如色譜柱要長時間保存,必須存于合適的溶劑下。對于反相柱可以儲存于純甲醇或乙腈中,正相柱可以儲存于嚴格脫水后的純正己烷中,離子交換柱可以儲存于水(含防腐劑疊氮化鈉或柳硫汞)中,并將購買新色譜柱時附送的堵頭堵上。儲存的溫度最好是室溫。
(內容參考儀器信息網(wǎng))