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一、熒光分光光度計的組成
熒光分光光度計的基本組成結構包括:顯示系統(tǒng)、樣品室、單色器、激發(fā)光源和檢測器。1、顯示系統(tǒng)
顯示系統(tǒng)由光度表、計算機操作系統(tǒng)等組成。
2、樣品室
通常由石英池架或固體樣品架組成。測量液體樣品時,光源與樣品成直角安排,測量固體樣品時,光源與樣品成銳角安排。
熒光儀上用的樣品池與紫外可見分光光度計上用的樣品池存在較大差異,紫外可見分光光度計上用的比色皿材質常為玻璃或石英,方形,兩面透光。測熒光用的樣品池稱為熒光池,是用石英材質制成,形狀也為長方形或方形,但四面透光。低溫熒光測定時還需在熒光池的外面再套一個充液氮的透明石英真空瓶。
3、單色器
單色器用來分離出所需要的單色光。早期的熒光計是以濾光片來分離單色光,現(xiàn)在熒光分光光度計中應用最廣的是光柵單色器。一般儀器上裝有兩個單色器,激發(fā)單色器和發(fā)射單色器。置于光源和樣品室之間的為激發(fā)單色器,篩選出特定的激發(fā)光譜。置于樣品室和檢測器之間的為發(fā)射單色器,篩選出特定的發(fā)射光譜。單色器上有進、出光兩個狹縫,增大狹縫寬度則信號強度增強,減小狹縫寬度則分辨率增大。單色器的色散能力與雜散光水平是兩個重要的性能指標,比較理想的單色器應具有低雜散光,以減少雜散光對熒光測量的干擾,同時具有高色散能力,以便弱的熒光也可以被檢測到。
4、激發(fā)光源
常見的激發(fā)光源有高壓氙燈、高壓汞蒸氣燈、激光器、閃光燈等。高壓氙燈能發(fā)射出強度較大的連續(xù)光譜,且在300~400nm范圍內強度幾乎相等,成為目前應用最多的連續(xù)光源。高壓氙燈的外殼為石英玻璃,內部充壓力為5倍標準大氣壓的氙氣,工作時壓力可達到20倍標準大氣壓。以激光器作光源時,激發(fā)光強度大且單色性好,能極大地提高熒光分析的靈敏度。此外,目前儀器中應用較多的閃光燈有氫燈、氮燈、脈沖激光燈等類型。
5、檢測器
檢測器是將光信號放大并轉為電信號,一般用光電管或光電倍增管(PMT)作檢測器。在一定條件下,PMT的電流量與入射光強度成正比,它測量的數(shù)據(jù)是眾光子脈沖響應的平均值。加在PMT上的電壓越高,則其放大作用越大。但是過大的電壓會造成PMT損壞,這點在實際使用中要注意。電荷耦合器件陣列檢測器(CCD)是近年來出現(xiàn)的一類新型的光學多通道檢測器,檢測光譜范圍寬、暗電流小、噪聲低、靈敏度高,可獲取彩色、三維圖像。因其價格比較昂貴,常用在高檔熒光儀上。
二、熒光分光光度計的日常保養(yǎng)
熒光分光光度計能夠對經(jīng)光源激發(fā)后產生熒光的物質或經(jīng)化學處理后產生熒光的物質進行成分分析,應用于生物化學、生物醫(yī)學、環(huán)境化工、食品檢測、水質分析、生命科學、藥物分析和藥理學等領域。
熒光分光光度計的日常保養(yǎng)具體如下:
1、每天檢查室內的防塵設施,發(fā)現(xiàn)紕漏及時維修。
2、每天清理儀器及周邊的灰塵,儀器外殼使用干凈的濕布,其它地方建議使用吸塵器。
3、熒光分光光度計的電源要穩(wěn)定,配備穩(wěn)壓器。
4、熒光分光光度計應放置在不潮濕、無振動的地方。
5、熒光分光光度計的放置應水平。
6、熒光分光光度計周圍保留30厘米以上空間,便于散熱。
7、不要在熒光分光光度計上放置重物。
8、不要用水及其它洗滌劑沖洗熒光分光光度計。
9、檢測結束后,請關閉熒光分光光度計的電源,延長其使用壽命。
10、不要擅自拆機。